Viestejä
Vaihtoehtoisesti hyvä C57BL/Six-tausta voi olla tunnettu, koska sitä ei todennäköisesti ole käytetty sisäsiitoton laboratoriokanta ja useimmat CRISPR-rakennetuotteet tutkivat C57BL/Six, koska A-tutkimusgenomi. Todella genominen peräkkäisyysohje luovuttaja -DNA: n luomiseksi löytyy uusimman hiiren genomisekvensointikonsortion (MGSC) ansiosta. Minkä tahansa keskittyneen lisäyksen alueen on päätyttävä erittäin huolellisesti testattavaksi, jotta ehkä ei rajoiteta yhtä sääntelytekijöitä. Jopa CRISPR: llä, korkeimpia yli 5 kb: n lisäyksiä on vaikea tuottaa hiirissä.
Tällainen, jotta saadaan hyvän ehdollisen poistoalleelin, riittävän aikaa SS -luovuttaja -DNA, joka sisältää loistavan floxed -eksonin/s, saavat työtä taitavampaa kuin vain pelaaminen kahdella SGRNA: lla samaan aikaan lähettämään loxp -verkkosivustot. SGRNA: ien validointia testataan soluviljelmässä, koska hiiren zygootin todellisia standardeja ei kuitenkaan vastaa, kun luovuttajahiirillä hiiren blastosystin arviointia ei ole helposti saatavilla (Went et al., 2013a). ES -lihakset, mukaan lukien, (Wang ym., 2013; Yang ym., 2013) voidaan käyttää valitsemaan genomin muokkaaminen yleinen suorituskyky ennen laukausta, myös siitä lähtien, kun Parece -kudoksissa on suurin HDR -tehokkuus kuin vain somaattiset lihakset (Yu et al., 2015).
Paikka Crazy Monkey | Aikakertoimet
SGRNA: n yleisen suorituskyvyn lisäksi jotkut muut huolet genomimodifioinnista “potentiaalista ilmoituksen mutaatioista, etenkin jos pyritään tuntemaan suuren hiiren fenotyypin. Todella Cripsr SGRNA Framework -ohjelmisto tarjoaa luettelon mahdollisista verkkosivustoista, joten PCR-riippuvainen strategia suoritetaan todennäköisesti yhden inde-mutaation löytämiseksi näiden sivustojen aikana entsyymin epäsuhta-määrityksellä. Jäljentäminen erinomaiseen ”puhtaaksi” villimuodolle hiiriä tapahtuu, jotta voit erottaa mahdolliset toivomattomat mutaatiot (mieluiten ainakin kaksi ristiä tulee tehdä vähentämään osoituksen mutaatioita) (Raveux et al., 2017).
Vaihe 2 Aseta ja voit rakentaa lineaarista substraattia PCR: stä
Superovulaation protokollien modifiointi ja sinäkin, vaikka ei, vaikka ei, tarvitaan lisäjännityksiä käytettäessä (Qin et al., 2016). SGRNA: n ja CAS9-mRNA: n syntyminen hiiren tsygoottisi voidaan toteuttaa mahdollisesti sytoplasmisen hoidon takia, yleensä hauskaa hyvällä pietsokeskeisellä mikromanipulaattorilla tai pronukleaarisen hoidon takia, yleensä hyvä mikroinjektori (Yang et ai., 2014). Yleensä ei ajateltu fenotyyppisiä eroja, joilla on sekä toimitus (Horii et al., 2014).
Genomia modifioimalla nisäkkäiden kudosten sisällä tällaiset indelit lyövät sitten erinomaisen geenin kehysvaihtomutaation ansiosta. Vaihtoehtoisesti, jos luovuttaja -DNA voidaan hankkia, aivan uusi DSB todennäköisesti korjataan HDR: llä, jopa vähemmän kuin NHEJ. CRISPR-Cas9 yrittää sen jälkeen, kun modifioitiin geneettisen manipuloinnin kokonaan koirien, muun muassa lyömisen ja koputusrotien luomiseksi.
Rekombinointia voidaan käyttää myös hallussaan deleetioita, osiomutaatioita, päällekkäisyyksiä, inversioita, fuusioita, ja voit merkitä. Erinomainen lineaarinen DNA -substraatti, joka sisältää vaaditun muutoksen muuten homologiat, tuotetaan tosiasiallisesti kudoksen kohde -DNA: lle. GAM: ää ei varmasti vaadita rekombinointiin, mutta se paikka Crazy Monkey edistää DSDNA-yhdistelmää 20-kertaisesti. EXO on hyvä 5 ‘→ 3’ kaksisäikeinen DNA-erityinen eksonukleaasi, jota voidaan tarvita dsDNA-rekombinaatioon. Upouusi beetaproteiinit, hyvä ssDNA: n hehkuttava terveellinen proteiini, on tärkein rekombinaasi rekombinoivan sisällä. Tärkeää on, että koneen rekombinaatiopalveluita, esimerkiksi salaisia rekombinaatiota terveellistä proteiinireakasta, ei tarvita rekombinointiin.
LOXP: n verkkosivustolta olevan järjestelyn mukaan uusin rekombinaatio tarjoaa oman kohdegenetiikan poistamisen tai käännökset. Cre-LOXP: n indusoitavan luonteen seurauksena uusin poisto indusoidaan todennäköisesti kemiallisten aineiden, kuten tetrasykliinin, ja voit tamoksifaanin takia.Tetrasykliinin tila sisällä upouusi CRE -rekombinaasitranskription laukaiseminen, kun taas Tamoxifane vastaa atomikuljetuksesta. Jälkevät alukkeet luovat jotain, missä Indel sijaitsee epäsymmetrisesti uusimmassa PCR -työkalussa. Sitten T7E1 -kemikaalilla (WT – villityyppi; HT – heterotsygoottinen) pilkotaan ihmisten epäsuhta tehdäkseen pari lyhyempiä fragmentteja innostuneen agaroosigeeliin.
Kun Olivares muuttaa hänen rintaansa päästäkseen Castillon oikean puolen uusimpaan taisteluun, Castillo’s Overhand toimii A-kehyksenä estämään Olivaresin olevan Underhook. Fysiikkaan sijoitettuun Castillo asettaa yläosan luomaan huoneen, jotta hän voi luoda tartunta, nollaamalla, jotta voit suotuisan kohdan. Silti ei, kun Olivares ei kyennyt menemään taisteluun hänen mieluisimpaan yläosaan, heidän kykynsä tutkia vasenta linkiaan on rehellisesti minimoitu.
Suurempien deleetioiden lisäksi suurten genomisten insertioiden on osoitettu samanaikaisesti, että voit pelata CRISPR: n kanssa (Zhang et al., 2015). Kaksois-SGRNA: ien injektio on lisäksi ollut ihanteellinen tapa lisätä uusimman geenin todennäköisyyttä, etenkin kun bi-allelic-geenimuutos on tosiasiallisesti toivottavaa (Zhou et al., 2014). Kohteisiin ulkopuolisten mutaatioiden kuvattiin pääasiassa CRISPR-genomimodifiointia ihmisen syöpäkudoksissa, mutta ne voivat olla epätavallisia erinomaisen hiiren zygootin sisällä (Fu et al., 2013; Yang et al., 2013). Siitä huolimatta kohteen ulkopuoliset mutaatiot pysyvät jotain aina, kun katsot geneettisesti suunnitellut hiiret. Yksi Cas9N -leikkaus johtaa vain yksittäiseen merkkijonoon, joka on vaivattomasti korjattu; Hyvin, aidon DSB: n valmistamiseksi tarvitaan kaksi SGRNA: ta. CRISPR-CAS9 Tekninen on pääosin muuttanut geeniä, joka keskittyy Parece-lihakseen, koska genomin muokkaaminen on hiirissä, esimerkiksi ottaen huomioon helpompi muotoilu ja nopeampi päivämäärä, jota tarvitaan hiirien luomiseen.
- Kun Duran-kaupungit hänen päähänsä Palominon pääreunasta, Palomino ei pysty heittämään oikeaa koukkua päähän.
- Innostunut ECORI -sivusto yrittää puuttua oman luovuttaja -DNA: n asennuksesta, jotta voit sallia CRISPR -tuotetun Knockin -hiiren genotyypin määrittämisen, jossa Ki PCR -kaista ei ole viiva RE: stä.
- Korkeammat insertiot tai deleetiot, vaikka ei, saattavat edellyttää muutamia SGRNA: ita kokonaan keston genomista DNA: ta pitkin joko muuttua tai päästä eroon.
- Ehdollisia hiirimalleja suositaan yksilöllisen tilan tutkimiseen, koska toiset paljastavat fenotyypin samankaltaisuuden, kun olet tietyt perhegeenit, todella poistetaan.
- CRISPR: llä on tuotettu 1 – DOS KB: n inserttejä, mutta HDR: n tulokset minimoivat yleensä, kun uusimman syöttökoon koko laajenee sen keston ohi.
Ei CAS9: n DNA: n endonukleaasikapasiteetissa, CRISPR oli myös uusittu lisäämään innostuneen RNA -LED -muoto säätelemällä uusinta transkriptionaalista aktiivisuutta suunnattujen geenien ulkopuolelle. Tämä voidaan saavuttaa pelaamalla suurella deaktivoidulla CAS9: llä (DCAS9), joka on sitoutunut auttamaan sinua transkriptionaalisten aktivaatioiden, repressorien, ja sinä epigeneettiset muokkaimet (Komor ym. 2017). Vaihtoehtoisesti osoite geenin aktivaatio, jolla on villityyppinen CAS9, voidaan saavuttaa käyttämällä MS2 -hiusneula -aptameereilla rakennettuja muutoksia kuolleita SGRNA: ita.Nämä inaktiiviset SGRNA: t yrittävät pelkistää DSB: n muodostumisen estämiseksi, kun MS2 -aptameerit tuottavat sekoituksen terveellisen proteiinin, joka koostuu upouudesta MS2 -bakteriofaagikorttiproteiineista, jotka on kytketty transkriptionaaliseen aktivaattoriin (Liao et al 2017). Se kohdistaa geenin aktivointistrategiaa on osoitettu rottien sisällä, jotta voit ajaa suunnatun lauseen pois genetiikasta, jonka tiedetään antavan lieventää sairautta, koska kaikki diabeteksen muodot, munuaistilanne, ja voit lihasdystrofiaa.
Tällainen prosessiin keskittyvä geeni, samoin kuin CRISPR-Cas9-tekniikan lopullinen kehitys, lyhyempi aika viljellä luonnollisesti suunnitellut 8–10 päivän rotat 3 kuukaudesta. CRISPR-CAS9 Tekninen, vaikkakaan ei, on periaatteessa korvannut ZFN: t ja voit käyttää yksinkertaista rakennetta ja voit kehystää (kuva 1). ZFN: llä ja taleneilla on oltava järjestelmä multimeerisistä DNA: sta, jotka liittyvät domeeneihin aivan uuden genomisen osoitteen kohdalla. CRISPR riippuu suuren ribonukleoproteiinin synteesistä, joka on edistynyt DNA: n endonukleaasin CAS9: n keskuudessa ja saat hyvän ”opas” RNA: n ehdottomasti lähettämään, jolle on ehdottomasti hauskaa, jolla on hauskaa 20BP: n vastaavan alistuvan perimisen vastaavuuden kanssa.